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舜丰突破 :快速,高效,植物转基因成分检测可以这样做
发布时间:2022-08-15 16:14:58 | 浏览次数:

随着全球转基因作物种植面积的不断增加,各国对转基因的监管日趋严格,因此对转基因成分的准确检测显得尤为重要(ISAAA Brief 55-2019)。目前对转基因作物的检测按照原理可以分为针对外源蛋白质,以及针对外源DNA的两种鉴定方法

两种方法中针对外源DNA的鉴定需要复杂的仪器设备;而针对酶联免疫的检测,受制于抗体的产生,一些转基因成分,特别是小分子成分比如启动子和终止子等元件很难建立检测反应。

为了有效支撑转基因相关产业的发展和管理,适应监管需求,需要开发建立一种快速,便捷,高灵敏度的田间转基因检测方法

近日,舜丰生物基因编辑研究院联合中国热带农业科学院三亚研究院在JIPB发表了最新研究成果。

该研究基于环介导的等温扩增(LAMP)和LbCas12a的反式切割活性,实现了对pCaMV35S启动子,NOS终止子,卡那霉素抗性基因(NPTII)及潮霉素磷酸转移酶基因(HPT)等难于建立酶联免疫检测的植物转基因成分的快速检测。

检出限精度增加

该研究开发了适用于大豆、玉米、水稻、番木瓜等的核酸粗提方法,取叶片简单研磨30s后,无需纯化即可用于LAMP扩增,通过筛选不同转基因元件的LAMP引物,转基因元件成分最低检出限为0.01%,高于转基因成分PCR检测标准极限值0.1%。


5min内达到最大的反式切割活性

该研究系统的优化了LbCas12a的缓冲体系,开发了一种高效的SF缓冲液,可以在5min内达到最大的反式切割活性。


开发的双链荧光报告分子是普通的3.5倍

研究者还找到了LbCas12a和MAD7特异切割的双链荧光报告分子,这种双链荧光报告分子的荧光强度是普通单链荧光报告分子的3.5倍


进一步减少检测成本

为了进一步的减少检测成本,研究者开发了10个样本的混样检测体系和35S启动子和潮霉素基因的双重检测能力。


取样到出检测结果仅需40min

为了减少核酸污染及提高整个装置的便携性,研究者开发了一款3D打印装置将等温扩增,CRISPR核酸检测和试纸条显色三者结合到一起。整个装置从取样到出检测结果只需要40min,可通过试纸条或蓝光灯来读取结果,通过小规模随机双盲测试,该研究开发的实验装置与PCR的结果100%一致。因此,该研究为田间转基因快检提供了高效,便携,高灵敏度,低成本的检测方式。





 
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